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關于細胞凍存液凍存與復蘇的操作守則

更新時間:2017-11-07 點擊次數(shù):1734
上一篇我們講到了細胞凍存液的使用注意事項,今天呢細胞凍存液廠家小編就給大家?guī)砑毎麅龃嬉旱膬龃媾c復蘇的操作方法
細胞凍存液的凍存和復蘇操作步驟:
細胞凍存和復蘇采取“慢凍快融”的原則,慢速冷凍可使細胞內(nèi)的水份滲出細胞外,減少細胞內(nèi)形成冰晶的機會,快融以保證細胞外結(jié)晶快速融化,避免慢速融化水份滲入細胞內(nèi),再次形成胞內(nèi)冰晶造成對細胞的損傷。
(一)細胞凍存液細胞凍存
配制含10%DMSO或甘油的細胞凍存液,4℃預冷(新鮮配制的凍存液會產(chǎn)生大量的熱);
取對數(shù)生長期的細胞,用細胞消化酶將單層生長的細胞消化下來;懸浮細胞則直接將細胞收集到離心管中;
離心1200rpm,6 min;
去除上清液,逐漸加入適量預冷的細胞凍存液,用吸管輕輕吹打使細胞均勻,計數(shù),調(diào)節(jié)凍存液中的細胞終濃度為5×10e6/ml~1×10e7/ml;
將細胞分裝入凍存管中,每管1~1.5ml;
在凍存管上標明細胞的名稱、凍存時間及操作人員姓名;
凍存:標準的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/min;到達-80℃時,則可迅速放入液氮中。
(二)細胞凍存液細胞復蘇
佩戴眼鏡和手套,從液氮中取出凍存的細胞管。
迅速放入38℃水浴中,并不時搖動,在1分鐘內(nèi)使其*融化,然后在無菌條件下取出細胞。
1200rpm/min離心5-10min,棄去上清,加入適量培養(yǎng)液混勻后接種于培養(yǎng)瓶中,次日更換一次培養(yǎng)液
想了解更多細胞凍存液信息歡迎客服
 

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