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關(guān)于膠原酶配置后的保存方法

更新時(shí)間:2020-10-24 點(diǎn)擊次數(shù):8681
   膠原酶是從溶組織梭狀細(xì)胞芽孢桿菌提取制備的,主要水解結(jié)締組織中膠原蛋白成分。當(dāng)擬消化的組織較硬,內(nèi)含較多結(jié)締組織或膠原成分時(shí),用胰蛋白酶解離細(xì)胞的效果較差,這時(shí)可采用膠原酶解離細(xì)胞法。 膠原酶僅對細(xì)胞間質(zhì)有消化作用而對上皮細(xì)胞影響不大。因此適于消化分離纖維性組織、上皮及癌組織,可使上皮細(xì)胞與膠原成分分離而不受損害。常用劑量為*終濃度200U/ml(約為1mg/mL)或0.03%~0.3%。膠原酶分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝細(xì)胞膠原酶,要根據(jù)所要分離消化的組織類型選擇膠原酶類型。
  關(guān)于膠原酶的配制和保存:
  1.配制的緩沖液:膠原酶應(yīng)該用氏液來配。不能用三蒸水因?yàn)闈B透壓太低細(xì)胞不能耐受,也不能用培養(yǎng)液因?yàn)槠渲械某煞謴?fù)雜對消化有影響,*也不用氏液因?yàn)镃a2+Mg2+離子易與一些成分結(jié)合形成沉淀影響分離(但這是理論上,我曾經(jīng)試過結(jié)果也還不錯(cuò)),PBS文獻(xiàn)上沒見過,但應(yīng)該理論上可以用的
  2.配制的方法:
  書上是36.5攝氏度攪拌溶解2h;4攝氏度過夜;0.22um過濾除菌;
  但網(wǎng)上有人的方法是:室溫下直接溶,好溶,溶完直接0.22um過濾除菌,據(jù)說也可行;
  3.配制的濃度:1mg/ml、0.1-0.5%、0.025%(不同組織采用不同濃度)
  4.配置后保存方法:
  有的人推薦現(xiàn)用現(xiàn)配;
  4度存放,*1~2周內(nèi)用完;
  長時(shí)間貯存宜在-20攝氏度,用前可放37度溶解,但溶解時(shí)間不能過久,防止酶活性受影響;
  5.消化組織時(shí)間:取決于消化液濃度和組織類型,一般消化時(shí)間為2-3小時(shí)或者4度過夜
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