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細(xì)胞凍存液如何配備呢?

更新時(shí)間:2020-11-16 點(diǎn)擊次數(shù):2614
   伴隨著科技進(jìn)步持續(xù)的發(fā)展趨勢(shì),醫(yī)學(xué)技術(shù)也在持續(xù)提高。前兩年冷凍人的惡性事件讓眼前一亮,原先不僅是食材能夠冷藏儲(chǔ)存,就連身體也可以冷藏儲(chǔ)存。假如要想做到那樣的目地,那麼就需要體細(xì)胞冷凍液,這類東西如何配備呢?下邊就來實(shí)際的了解一下,細(xì)胞凍存液的秘方是啥?
  細(xì)胞凍存液的配方是什么?
  (一)細(xì)胞凍存
  1. 配置含10%DMSO或凡士林、10~20%小牛血清的凍存細(xì)胞培養(yǎng)液;
  2. 取對(duì)數(shù)成長(zhǎng)期的體細(xì)胞,除去舊細(xì)胞培養(yǎng)液,用PBS清理。
  3. 除去PBS,添加適量蛋白酶(遮蓋細(xì)胞培養(yǎng)皿表層)把單面生長(zhǎng)發(fā)育的體細(xì)胞消化吸收出來;
  4. 抽濾1000rpm,5min;
  5. 除去蛋白酶,添加適量配置好的凍存細(xì)胞培養(yǎng)液,用塑料吸管輕輕地吹打使體細(xì)胞勻稱,記數(shù),調(diào)整凍存液中體細(xì)胞的后相對(duì)密度為5牙周106/ml~1牙周107/ml;
  6. 將體細(xì)胞分裝進(jìn)凍存管中,每管1~1.5 ml;
  7. 在凍存管上標(biāo)出體細(xì)胞的名字,凍存時(shí)間及作業(yè)者;
  8. 凍存:標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序流程為減溫速度-1~-2℃/min;當(dāng)溫度達(dá)-25℃下列時(shí),可升至-5℃~-10℃/min;到-100℃時(shí),則可快速滲入液態(tài)氮中。也可將配有體細(xì)胞的凍存管放進(jìn)-20℃電冰箱2h,隨后放進(jìn)-70℃電冰箱中留宿,取下凍存管,移進(jìn)液氮容器內(nèi)。
  (二) 細(xì)胞復(fù)蘇
  1. 從液氮容器中取下凍存管,立即滲入37℃溫開水中,并時(shí)常搖晃令其盡早溶化。
  2. 從37℃水浴中取下凍存管,開啟外蓋,用塑料吸管吸出來體細(xì)胞懸液,加到離心管并滴加10倍以上細(xì)胞培養(yǎng)液,攪拌;
  3. 抽濾, 1000rpm,5min;
  4. 棄去上清液,添加含10%小牛血清細(xì)胞培養(yǎng)液重懸體細(xì)胞,記數(shù),調(diào)節(jié)體細(xì)胞相對(duì)密度,打疫苗塑造瓶,37℃恒溫箱靜放塑造;
  5. 隔日拆換一次細(xì)胞培養(yǎng)液,再次塑造。
  常見問題
  1.從繁衍期到產(chǎn)生高密度的單層細(xì)胞之前的塑造體細(xì)胞都能夠用以凍存,但zui是為多數(shù)成長(zhǎng)期體細(xì)胞。在凍存前一天*是換一次細(xì)胞培養(yǎng)液;
  2.將凍存管放進(jìn)液氮容器或從這當(dāng)中取下時(shí),要搞好安全防護(hù)工作中,以防凍傷;
  3.凍存和再生zui用新配置的細(xì)胞培養(yǎng)液。

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