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原位雜交DNA探針的標記如何選擇購買,速來圍觀

更新時間:2020-12-17 點擊次數(shù):2523

介紹

        可變長度的核酸片段(DNA探針)能夠與互補的核酸鏈形成非共價、高度特異的雙鏈(稱為雜交)。當一個標簽附加到這樣一個雜交探針的檢測可以有效地服務(wù)于定義目標DNA序列標記DNA探針通常用于原位雜交實驗研究和臨床診斷特定染色體的DNA序列,以及潛在的畸變(突變。缺失和/或重復(fù))被檢測到并定位在固定的組織和細胞內(nèi)。

原位DNA的可視化要么通過熒光讀數(shù)(熒光原位雜交(FISH)),要么通過顯色檢測(顯色原位雜交(CISH)),這依賴于酶促反應(yīng)導(dǎo)致有顏色的底物沉淀。

 

原位雜交中對DNA探針的標記通常是使用標記DNA聚合酶(=聚合酶鏈反應(yīng)(PCR))或DNA酶I/ DNA聚合酶1的混合物(-NT)(表1)

 

表1原位雜交DNA探針可通過Nick Translation或PCR酶標

 Nick TranslationPCR
       原則                                                                            DNA酶 I在dsDNA中引入隨機單鏈斷裂('nicks '),隨后由DNA聚合酶I填充,使用標記的dNTP作為其天然配對物的替代物                                                                              一段特定核酸片段的擴增(用特定引物或多段DNA進行PCR)利用Taq聚合酶摻入標記的dNTP取代其自然對應(yīng)物的位點(用退化寡核苷酸引物進行PCR (dopo -PCR))
模板線性化的dsDNA的pmol量線性化的dsDNa的fmol數(shù)量
標記片段大小100–500 bp dsDNAup to 1500 bp
擴增

 

熒光dUTP & dCTP

熒光dUTP和dCTP可用于酶促標記DNA探針一步完成。標記后的DNA探針可通過熒光顯微鏡或光譜直接顯示。組合標記,例如用不同或*的熒光團標記探針,允許同時顯示多個目標(多路復(fù)用)41熒光團的選擇取決于可用的激發(fā)源、濾光片組、應(yīng)用(單色或多色成像)(表2)和所需的酶標技術(shù)(Nick Translation或PCR)(表3)。

熒光團的光穩(wěn)定性親水性都是決策時需要考慮的關(guān)鍵參數(shù)。例如,光穩(wěn)定性提高的熒光團一般可以增加靈敏度,從而提高目標序列的檢測極限。然而,熒光團的親水性直接影響相應(yīng)標記的dUTP和dCTP的基材性能用親水(如Cy3)或中度疏水染料(如德州紅)標記的dUTP和dCTP是PCR和Nick翻譯標記的理想選擇。相反,疏水熒光載體(如ATTO0647N)會導(dǎo)致DNA擴增的提前終止,很可能是由于染料-dve或染料-酶的相互作用,因此僅推薦用于Nick Translation。

 

表2所選熒光染料的光譜特性。++:好,+:中等,-:poon請注意:呋酚的性能取決于呋酚的應(yīng)用,呋酚是親水性和光穩(wěn)定性之間的一種承諾,這分別決定了親水性和光穩(wěn)定性的親水性和檢測靈敏度。

表3酶合成的熒光dUTP和dCTP。n / a:不適用

 

華雅思創(chuàng)現(xiàn)貨產(chǎn)品:

品牌貨號名稱包裝規(guī)格
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JenaNU-803-XX-532-LATTO532-dUTP,1mM,5x10μL
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